熒光素酶報告基因是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。

Luciferase報告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。然后可以通過熒光測定儀也稱化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃測定儀測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達(dá)。是檢測 轉(zhuǎn)錄因子 與 目的基因 啟動子區(qū)DNA相互作用的一種檢測方法。

雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)介紹

生物體內(nèi)DNA轉(zhuǎn)錄成RNA是基因表達(dá)的關(guān)鍵過程,基因表達(dá)調(diào)控主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平?；蚍肿由飳W(xué)研究領(lǐng)域的趨勢之一是逐漸從基因結(jié)構(gòu)和功能分析轉(zhuǎn)到基因順式作用元件和轉(zhuǎn)錄因子及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制上,對基因調(diào)控的研究將是今后相當(dāng)長一段時間內(nèi)功能基因組學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。雙熒光素酶報告基因檢測(Dual- Luciferase reporter assay,DR)已成為研究轉(zhuǎn)錄因子參與基因調(diào)控的有效手段,通過對啟動子DNA片段的分析,驗證啟動子結(jié)合元件的反式激活能力,探討轉(zhuǎn)錄因子在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的分子機(jī)制。

熒光素酶報告應(yīng)用原理

轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構(gòu)、行使調(diào)控基因表達(dá)功能的蛋白質(zhì)分子，也稱為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結(jié)合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式作用元件實現(xiàn)共價結(jié)合，從而對基因的表達(dá)起抑制或增強(qiáng)的作用。熒光素酶報告基因?qū)嶒灒╨uciferase assay）是檢測這類轉(zhuǎn)錄因子和其靶啟動子中的特異順序結(jié)合的重要手段。

其原理簡述如下：

（1）構(gòu)建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達(dá)序列前方的報告基因質(zhì)粒，如pGL3-basic等。

（2） 將要檢測的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒與報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞或其它相關(guān)的細(xì)胞系。如果此轉(zhuǎn)錄因子能夠激活靶啟動子，則熒光素酶基因就會表達(dá)，熒光素酶的表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄因子的作用強(qiáng)度成正比。

（3） 加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應(yīng)，產(chǎn)生熒光，通過檢測熒光的強(qiáng)度可以測定熒光素酶的活性，從而判斷轉(zhuǎn)錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。

客戶須知：

客戶需提供基因序列信息，待研究轉(zhuǎn)錄因子信息。

服務(wù)中的轉(zhuǎn)染效率；

使用的熒光素酶報告基因檢測試劑盒；

提供給客戶目的基因的質(zhì)粒和甘油菌；

生物服務(wù)內(nèi)容

目的基因的調(diào)取及載體構(gòu)建；

基因測序以及載體構(gòu)建；

將構(gòu)建質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到目的細(xì)胞；

使用熒光素酶報告基因檢測試劑盒檢測；

比較處理組和對照組的熒光酶活性。